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薄層色譜法標準操作規程

日期:2020-11-13 22:09
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摘要: 薄層色譜法標準操作規程 1 簡述:薄層色譜法,是將適宜的固定相塗布於玻璃板上,成一均勻薄層。等點樣、展開後,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別,雜質檢查或含量測定的方法。 2 儀器與材料: 2.1 玻板:除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑,平整、洗淨後的不附水珠,晾幹。 2.2 固定相或載體:*常用的有矽膠G、矽膠GF、矽膠H、矽膠HF254,其次有矽藻土、矽藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小,一般...

薄層色譜法標準操作規程

    1 簡述:薄層色譜法,是將適宜的固定相塗布於玻璃板上,成一均勻薄層。等點樣、展開後,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別,雜質檢查或含量測定的方法。
 
    2  儀器與材料:
    2.1 玻板:除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑,平整、洗淨後的不附水珠,晾幹。
    2.2 固定相或載體:*常用的有矽膠G、矽膠GF、矽膠H、矽膠HF254,其次有矽藻土、矽藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小,一般要求直徑為10—40µm。薄層塗布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者係將固定相直接塗布於玻璃板上,後者係在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10—15%煆石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小時),混勻後加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5—0.7%)適量調成糊狀,均勻塗布於玻璃板上。也有含一定展開液或緩衝液的薄層。
    2.3 塗布器:應能使固定相或載體在玻璃板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
    2.4 點樣器:常用具支架的微量注射器或定時毛細管,應能使點樣位置正確集中。
    2.5 展開室:應使用適合薄層板大小的玻璃製薄層色譜展開缸,並有嚴密蓋子,除另有規定外,底部應平整光滑,應便於觀察。
 
    3 操作方法:
    3.1 薄層板製備:除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表麵的泡後,倒入塗布器中,在玻璃板上平穩地移動塗布器進行塗布(厚度為0.2—0.3mm),取下塗好薄層的玻璃板,置水平台上於室溫下晾幹,後在110℃烘30分鍾。即置有幹燥劑的幹燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
    3.2 點樣:除另有規定外,用點樣器點樣於薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,點樣直徑為2——4mm,點間距離約為1.5—2.0cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表麵。
    3.3 展開:展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使係統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5—1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,等展開至規定距離(一般為10—15cm),取出薄層板,晾幹,按各品種項下的規定檢測,如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明,結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度範圍內呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描,進行比較並計算定量,以減少誤差。各種供試品,隻有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。
    4 注意事項:
    4.1 所用玻璃板應洗淨不掛水珠,光滑平整。
    4.2 鋪板要均勻,厚度適宜,並於室溫下晾幹後在110℃活化30分鍾,置於有幹燥劑的幹燥箱或幹燥器中備用。
    4.3 點樣點一般為圓點,不能太大。